CoroNa Green, AM, Cell Permeant 生化試劑

CoroNa Green, AM, Cell Permeant 鈉離子指示探針

產(chǎn)品關(guān)鍵詞

CoroNa Green, AM；Sodium indicator 鈉離子指示劑（熒光探針）；SBFI AM；Asante NaTrium Green-2 AM；APG-2 AM；PBFI AM；Fluo-4 am；鉀離子熒光探針；Gramicidin 短桿*-菌肽；CCCP；

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

CoroNa Green, AM是一種具細胞膜滲透性的鈉離子（Na+）指示探針。一旦進(jìn)入細胞后，經(jīng)非特異性酯酶水解生成不具有膜滲透性的CoroNa Green，一旦與Na+結合，綠色熒光明顯增強，但波長(cháng)發(fā)生很少變化（見(jiàn)附圖I）。與其他Na+指示探針SBFI（MX4533、MX4509）和ENG-2（MX4514、MX4534）一樣，當存在生理濃度的其他單價(jià)陽(yáng)離子時(shí)，CoroNa Green允許從時(shí)間和空間上來(lái)選擇性分辨Na+濃度的變化。分子量更小的CoroNa Green（586），相比較于其他大分子量的Na+指示探針ENG-2（1087），在同等條件下，其膜滲透性的衍生物能更好的加載進(jìn)入胞內。CoroNa Green能響應更廣泛的Na+濃度范圍（見(jiàn)附圖II），Kd~80mM。不同于傳統的SBFI，與Na+結合后的CoroNa Green的最大吸收和發(fā)射波長(cháng)分別是492nm和516nm，因此，兼容于任何能檢測熒光素（Fluorescein）的儀器，包括：流式細胞儀、熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡、熒光酶標儀和熒光光度計。CoroNa Green是一款有價(jià)值的工具，用來(lái)分析細胞外和細胞內的鈉離子水平[1-2]。

產(chǎn)品特征

1）   同義名：CoroNa Green acetoxymethyl (AM) ester

2）   分子量：657.62 g/mol

3）   純度：≥90%（HPLC）

4）   外觀(guān)：固體

5）   最大吸收/發(fā)射波長(cháng)：492/516nm

6）   解離常數（Kd）：~80mM

7）   溶解性：DMSO

保存與運輸方法

保存：≤-20oC避光干燥保存，至少1年有效。

運輸：冰袋運輸。

注意事項

1）   整個(gè)染色過(guò)程中需注意避光。

2）   為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

使用方法（活細胞成像分析）

以下步驟僅做參考，具體請根據實(shí)際情況或參考文獻資料來(lái)調整。

1.1   儲存液準備：于實(shí)驗前，將低溫保存的CoroNa Green AM從冰箱取出平衡至室溫（至少20min），低速離心后再開(kāi)蓋，直接往管內加入高質(zhì)量的無(wú)水DMSO配制成1-10mM儲存液，比如：往50μg CoroNa Green, AM固體（Mw：657.62）加入15μl DMSO，充分溶解后配制成5mM儲存液?！?20oC分裝干燥凍存，避免反復凍融。

1.2   工作液準備：于實(shí)驗前，用生理緩沖液比如：HHBS（MS3510-500ML）、HBSS（MS3505-500ML）或無(wú)血清培養基稀釋一定量的儲存液，使其工作濃度在0.5-10µM，初次使用務(wù)必摸索幾個(gè)梯度濃度的探針，以確認適宜的工作濃度。工作液必須現配現用。

1.3   染色步驟：

1.4   熒光檢測

應用示例（來(lái)自文獻，僅做參考）

1）   文獻來(lái)源：Fujishima A, Takahashi K, Goto M, Hirakawa T, Iwasawa T, Togashi K, Maeda E, Shirasawa H, Miura H, Sato W, Kumazawa Y, Terada Y. Live visualisation of electrolytes during mouse embryonic development using electrolyte indicators. PLoS One. 2021 Jan 29;16(1):e0246337. doi: 10.1371/journal.pone.0246337. PMID: 33513193; PMCID: PMC7845971.

實(shí)驗目的（Na+imaging）：胚胎（從桑椹胚至孵化期）用0.5µM CoroNa Green AM加載，37℃孵育30min。之后，用LSM780共聚焦顯微鏡來(lái)測定胞內和/或囊胚腔的熒光強度。激發(fā)和發(fā)射波長(cháng)分別是488nm和510-520nm，相同實(shí)驗至少重復3次。

2）   文獻來(lái)源：Fu T, Xu C, Li H, Wu X, Tang M, Xiao B, Lv R, Zhang Z, Gao X, Liu B and Yang C (2022) Salinity Tolerance in a Synthetic Allotetraploid Wheat (SlSlAA) Is Similar to Its Higher Tolerant Parent Aegilops longissima (SlSl) and Linked to Flavonoids Metabolism. Front. Plant Sci. 13:835498. doi: 10.3389/fpls.2022.835498

實(shí)驗目的（Na+imaging）：小麥種子水培10天后，暴露于150mM NaCl溶液7天。之后加入CoroNa Green AM來(lái)觀(guān)察小麥根部細胞內的Na+分布。小麥根部用含探針的染色工作液（20 μM CoroNa Green AM, 5 mM KCl, 5 mM Ca2+-MES, pH 6.1）避光孵育1h。用蒸餾水清洗染色部位。使用共聚焦成像儀（激發(fā)：488nm，發(fā)射：505-525nm）來(lái)觀(guān)察根部的分生組織區和成熟區。

Fig. Effects of salinity stress on Na+ and K+ homeostasis in a synthetic tetraploid wheat line and its diploid parents. (A,B) Na+ distribution in root cell indicated by CoroNa Green AM under salinity stress. (C–F) Na+ and K+ concentration. The seedlings were exposed to 150 mM NaCl for 7 days. The values are the mean (± SD) of three biological replicates. Different letters above the bar showed significant differences among wheat lines and treatments according to t-test (P < 0.05).

3）   文獻來(lái)源：Bortner, C.D., Oakley, R.H. & Cidlowski, J.A. Overcoming apoptotic resistance afforded by Bcl-2 in lymphoid tumor cells: a critical role for dexamethasone. Cell Death Discov. 8, 494 (2022).

實(shí)驗目的（Determination of intracellular potassium, sodium, and calcium）：于檢測前1h，取 2?ul 的2.5?mM CoroNa Green-AM (Na+) or PBFI-AM (K+) 儲存液加入1ml細胞溶液中，使其終濃度為5?uM。于檢測前30min，取4?ul的1mM Fluo-4加入1ml細胞溶液中。于37?°C, 7% CO2 中孵育細胞. 于流式分析前再加入PI使其工作濃度為10?ug/ml. 用裝有FACSDiVa 軟件的LSRII流式細胞儀進(jìn)行數據分析。僅將碘化丙啶染色陰性的細胞進(jìn)行相對的胞內離子濃度分析。

參考文獻

[1] Naumann G, Lippmann K, Eilers J. Photophysical properties of Na+ -indicator dyes suitable for quantitative two-photon fluorescence-lifetime measurements. J Microsc. 2018 Nov;272(2):136-144. doi: 10.1111/jmi.12754. Epub 2018 Sep 7. PMID: 30191999.

[2] Sediqi H, Wray A, Jones C, Jones M (2018) Application of Spectral Phasor analysis to sodium microenvironments in myoblast progenitor cells. PLoS ONE 13(10): e0204611. http**-s://doi.org/10.1371/journal.pone.0204611

相關(guān)產(chǎn)品